QFPCR – utilidade na análise genética de produtos de abortamento

Livro de casos clínicos - 2019 - Caso 10

Indíce

• Nota introdutória
• Sumário
• Introdução
• Caso
• Discussão

Sumário

Cerca de 15% das gestações terminam em aborto espontâneo e destas aproximadamente 50% são devidas a anomalias cromossómicas. A identificação da causa da perda gestacional é muito importante para os casais e pode ser determinante para avaliação de risco de recorrência em futuras gestações permitindo avaliar opções reprodutivas (1, 4). A análise citogenética dos produtos de abortamento sempre foi o método laboratorial usado para detetar as anomalias cromossómicas. No entanto, esta técnica apresenta uma elevada taxa de insucesso uma vez que a sua eficácia depende do tipo e da qualidade da amostra testada.

A polimerase chain reaction fluorescente quantitativa (QFPCR) uma técnica rápida, que apresenta uma boa relação custo-benefício, na qual regiões microssatélites de determinados cromossomas são amplificadas por PCR. Este método permite detetar as anomalias cromossómicas mais frequentes em amostras de produtos de abortamento (2, 3). Descrevemos um caso clínico onde foi detetado um feto triploide através do QF-PCR.

Introdução

Dentro das anomalias cromossómicas observadas no primeiro trimestre de gravidez e que podem originar perda gestacional, as trissomias são as anomalias mais frequentemente detetadas (61,2%), seguidas das triploidias (12,4%), da monossomia X (10,5%), tetraploidias (9,2%) e cerca de 4,7% são outro tipo de anomalias cromossómicas.

O método mais utilizado para análise genética dos produtos de abortamento é a cultura e análise do cariótipo, mas em cerca de 30% dos casos não é possível obter um resultado. As causas prendem-se essencialmente com:

• Contaminação microbiológica da amostra cultivada;
• Ausência de crescimento celular devido ao facto de as células fetais não estarem viáveis;
• Crescimento predominante de células maternas condicionando a análise citogenética a não refletir o cariótipo fetal.

O QF-PCR pode ser utilizado para a avaliação do número de cópias de um cromossoma através da amplificação de sequências repetidas (do inglês small tandem repeats) em loci polimórficos. Estas sequências repetidas são amplificadas por PCR e os fragmentos obtidos são separados por eletroforese capilar utilizando um Sequenciador automático. Um padrão alélico de dois picos iguais na mesma região cromossómica indica a presença de duas cópias da região-alvo (1:1), enquanto três picos na mesma região cromossómica (1:1:1) ou dois picos com uma razão de áreas de 1:2 é indicativa de trissomia dessa região (Figura 1).

A utilização da técnica QF-PCR apresenta uma menor taxa insucesso e um maior e muito mais rápido rendimento diagnóstico permitindo uma resposta útil aos casais com perdas gestacionais recorrentes no primeiro trimestre.

Caso

Recebemos para análise genética restos abortivos de uma gestação de 9 semanas, resultantes da administração de misoprostol (Cytotec), por decisão clínica, perante morte fetal intrauterina. A gestante tem 32 anos de idade e esta é a terceira perda gestacional no primeiro trimestre, mas a primeira a ser avaliada geneticamente. Foi proposta a realização do QF-PCR em DNA extraído quer do produto de abortamento (recolhido em contentor estéril e transportado em soro fisiológico), quer do sangue da mãe

através do QSTRplus-v2 Kit da Elucigene que pesquisa os cromossomas 13, 18, 21, X e Y. O resultado obtido mostrou uma contribuição trialélica para todos os marcadores analisados correspondentes aos cromossomas 13, 18 e 21, consistente com um feto triploide (Figura 2).

A comparação do perfil genético materno com o fetal permitiu determinar que a origem paterna dos terceiros alelos observados em cada um dos marcadores uma vez que o feto apenas partilha um dos 3 alelos com a mãe (Figura 3).

Discussão

A triploidia (presença no feto de 69 cromossomas em vez de 46) é uma das causas frequentes de abortamento espontâneo, ocorre independentemente de idade materna e pode ser o resultado de digenia (conjunto haploide extra da mãe) ou diandria (conjunto haploide extra do pai) (5). Neste caso foi possível identificar a origem paterna do conjunto haploide extra porque foi usado um teste molecular e confirmar que a formação do triploide ocorreu ou pela fecundação de um óvulo por 2 espermatozoides (dispermia) ou pela fecundação de um óvulo por um espermatozoide diploide (diandria). A esta triploidia dá-se o nome de mola hidatiforme parcial. O risco de recorrência de uma gravidez molar é baixo (1/80) no entanto, nestas situações está recomendada a monitoração

dos níveis plasmáticos de BhCG para avaliar a possível ocorrência de neoplasia trofoblástica gestacional (6). A identificação da causa da perda gestacional é muito importante para um adequado aconselhamento ao casal em futuras gestações. Cerca de 50% dos abortamentos precoces são causados por aneuploidias (alteração do número de um cromossoma) ou por triploidias (todo o complemento cromossómico se encontra triplicado) que ocorrem de forma esporádica após erros mitóticos, meióticos ou pós-zigóticos, e nestes casos, o prognóstico para futuras gestações é favorável. Os métodos moleculares, em particular o QF-PCR, tornam possível uma avaliação mais rápida e eficiente do que os métodos culturais e citogenéticos, com uma boa relação custo-benefício.